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->關(guān)于PCR假陰性問題總結(jié)概括 |
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關(guān)于PCR假陰性問題總結(jié)概括 |
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一、 攝譜儀因素
PCR實驗對攝譜儀的倚賴性是頎長的，離心思、擴增儀都是導致PCR假陰性的因素。擴增儀的主要問題是孔間差，引動擴增敗績可擴增速率減低。而離心思的影響則更容易被不重視。國內(nèi)運用離心思很少運用離心加速度（XXXg）作為參變量指標，而常運用轉(zhuǎn)數(shù)作為參變量指標，這處就存在著一個問題，因為離心思的體積不一樣，管用跳心半徑也不一，因為這個一樣的轉(zhuǎn)速所萌生的離心思相差非常大(有的在數(shù)倍以上)，所以在相同的離心時間下，可能模型板并沒有離心下來，導致PCR假陰性。這個問題在其它實驗也有，但因基他實驗都是標定大分子蛋白沉淀，對離心的速度要求較低所以不太表面化。提議運用小規(guī)模臺式離心思的實驗要注意一下子這個問題。
二、試藥品質(zhì)問題
PCR實驗的成功與否試藥的品質(zhì)至關(guān)關(guān)緊，試藥的品質(zhì)問題牽涉到多個方面：細胞的裂解；模型板的抽提；引物位點的挑選；Taq酶的活性等等。那里面任一環(huán)節(jié)出了問題都會引動最后結(jié)果的假陰性。這些個都是試藥品質(zhì)的問題，因為這個選用高品質(zhì)的PCR試藥十分關(guān)緊。
三、核酸模型板問題
核酸模型板品質(zhì)問題是抑制PCR最關(guān)緊的因素之一。核酸模型板在擴增區(qū)顯露出來斷開、蛋白粘貼、空間位阻等模型板品質(zhì)問題都可能引動擴增敗績導致最后結(jié)果的假陰性或定量不正確。因為不管啥子提出取得辦法都沒可能獲得絕對理想化的核酸模型板，因為這個核酸模型板品質(zhì)固然與試藥的品質(zhì)相關(guān)，但它沒可能由試藥品質(zhì)絕對解決。
核酸模型板問題除開模型板本身的問題外，還存在模型板溶液中制約Taq酶活性成分（如某些蛋白、離子等）效用，而造成擴增速率減低甚至于擴增敗績的問題。對此，有人鼓勵大家施行模型板醇化，效果較為表面化。但另一個問題又顯露出來了，那就是怎樣保障醇化的回收率問題?？傊?，核酸模型板問題是必然性的問題，只能盡力盡量去減損。
四、操作擔任職務(wù)的人素質(zhì)能力問題
PCR實驗的環(huán)節(jié)眾多，并且對每一環(huán)節(jié)的品質(zhì)要求都頎長，例如少加、漏加試藥、離心不充分、循環(huán)參變量預(yù)設(shè)不正確、對于RNA抽提降解、局勢惡化錄敗績等等都能導致最后結(jié)果的假陰性。因為這個要求PCR的實驗操作擔任職務(wù)的人有美好的素質(zhì)能力，能夠恪守操作規(guī)程，并能敏感的發(fā)覺問題和解決問題。
五、其它
PCR實驗中從樣品的搜集、運送、保留著手就可以引動最后結(jié)果的假陰性，而對于病原體格檢查驗測定（如HBV）在人的身體血液系統(tǒng)顯露出來有周期性變動也是值當注意的因素。
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